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什么是凝膠滲透色譜柱

更新時間:2023-12-11      點擊次數(shù):1832

凝膠滲透色譜(Gel Filtration Chromatography)是一種基于凝膠顆??讖酱笮〉姆蛛x技術(shù),也稱為分子排斥色譜(Size Exclusion Chromatography)。凝膠滲透色譜柱是用于進(jìn)行此類分離的專門色譜柱。

凝膠滲透色譜柱是由一種或多種高分子材料制成的,如微球、基質(zhì)顆粒等。這些高分子材料通常是交聯(lián)的,并具有孔徑分布的大小。這些孔徑大小可以根據(jù)材料的制造方式進(jìn)行調(diào)整。

樣品在進(jìn)入凝膠滲透色譜柱時,會與凝膠顆粒相互作用,樣品大分子會被藍(lán)色顆粒的微孔所隔離,無法進(jìn)入顆粒內(nèi)部,因此進(jìn)一步阻止了大分子向內(nèi)層移動的能力。而較小的分子則可以進(jìn)入顆粒的內(nèi)部,因此會相對快速地通過凝膠顆粒。這樣,不同分子大小的樣品可以在凝膠滲透色譜柱中分離出來。

凝膠滲透色譜柱的分離能力基于分子量分布的性質(zhì),因此特別適用于高分子化學(xué)和生物化學(xué)的分離和純化。例如,它常用于分離和純化蛋白質(zhì)、DNA、RNA、糖類和多肽等高分子物質(zhì)。其分離過程不依賴于分子的化學(xué)性質(zhì),可以分離富含分子的混合物,同時還可以用于精確分子量的確定。

需要注意的是,選擇適合的凝膠滲透色譜柱時,應(yīng)根據(jù)待分離物質(zhì)的分子量范圍選擇適當(dāng)?shù)目讖酱笮 H绻讖竭^小,則不能分離大分子,如果孔徑過大,則不能分離小分子。

TPChrom Beads凝膠滲透色譜填料的優(yōu)勢:
高度的粒徑均一性,球形,反壓低,洗脫體積小分離度大,分辨率高,裝柱容易,線性流速大。

產(chǎn)品名稱

粒徑大小um

基質(zhì)

交聯(lián)度%

主要特點

分子排阻極限, Da

TPChrom  Beads X1

42

 

PS/DVB

1

溶脹能力強(qiáng),較軟,耐壓低適用于中低壓制備色譜

溶脹能力弱,較硬,耐壓高

適用于中高壓制備色譜

14000

TPChrom  Beads X3

3

1000-2000

TPChrom  Beads X8

8

400-1000

TPChrom  Beads X12

12

≤400


凝膠滲透色譜柱適用于有機(jī)溶劑體系半微量的高性能的SEC分析柱。由粒徑均一,但每個填料上分布大小不同的孔,即由細(xì)孔多分散型均一粒徑的填料裝填而成。從而實現(xiàn)了校正曲線的優(yōu)異的線形相關(guān)關(guān)系。
 
使用細(xì)孔多分散型分析柱獲得的校正曲線沒有變曲點。因而色譜圖中的測定峰形不會出現(xiàn)不規(guī)則的凹凸現(xiàn)象可提供適用于分子量分布范圍不同的三種規(guī)格分析柱。

GPC凝膠滲透色譜柱

GPC凝膠滲透色譜柱

凝膠滲透色譜柱的結(jié)構(gòu)及主要功能:

由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲(封頭)與柱填料等組成。
(1)柱管:多用不銹鋼制成,若果使用時柱壓不高于70kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
(2)壓帽:即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽,中部有小孔,多為聚四氟乙烯制成,用于固定篩板。
(3)密封環(huán):位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán),多為聚四氟乙烯制成,用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
(4)篩板:位于色譜柱兩端緊貼柱管端的篩網(wǎng)狀薄片,由燒結(jié)不銹鋼或鈦合金制成,孔徑取決于填料粒度,一般為0.2~20&um。用于防止填料從柱管內(nèi)漏出。
(5)接頭:柱兩端連接流動相與柱管的中空環(huán)套,由不銹鋼制成。用于柱管路聯(lián)通與柱端高壓固定。
(6)封頭:柱兩端的密封螺絲,用于保存色譜柱時封頭。
(7)柱填料:裝填于柱管內(nèi)的固定相擔(dān)體,其直接決定了色譜柱的類型與用途,是色譜柱的核心。多為無定形或球形硅膠基質(zhì),也有環(huán)糊精、活性炭、聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙酸酯、氧化鋁等基質(zhì)。用于色譜分離。

凝膠滲透色譜柱是一種強(qiáng)大的高分子分離和純化工具,可廣泛應(yīng)用于化學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域。 

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