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層析柱的裝填好壞直接影響其分配效果

更新時間:2022-11-08      點擊次數(shù):870
  在蛋白質(zhì)的分離純化過程中,離不開層析柱的使用,但層析柱的裝填好壞,直接影響其分配效果,進而影響產(chǎn)品的回收率及純度。
 
  目前,國內(nèi)外工業(yè)級層析柱的裝填方法主要為吸入式和置換式兩種。置換式在裝填小直徑層析柱時效果很好,但在層析柱直徑較大時(通常直徑在800mm以上)分配效果較差。因此廣泛采用的裝填方法為吸入式,即通過層析柱柱頭下壓至層析柱底部,將預先混勻的勻漿液通過活塞的方式吸入層析柱內(nèi)。
 
  層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。柱層析技術又稱柱色譜技術,主要原理是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復分配將組分分離開來。

 

 
  柱層析操作時,先在圓柱管中先填充不溶性基質(zhì),形成一個固定相。將樣品加到柱子上,用特殊溶劑洗脫,溶劑組成流動相。在樣品從柱子上洗脫下來的過程中,根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復分配將組分分離。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。
 
  柱層析的上樣也有干法和濕法之分:干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后,在加入少量硅膠,拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。
 
  干法上樣較麻煩,但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑(最好就是展開劑,如果展開劑的溶解度不好,則可以用一極性較大的溶劑,但必須少量)將樣品溶解后,再用膠頭滴管轉移得到的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后,再加入。

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