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想知道親和層析空柱該如何進(jìn)行上樣那就不要錯(cuò)過本篇

更新時(shí)間:2022-11-21      點(diǎn)擊次數(shù):926
  親和層析空柱是專為抗體、重組蛋白和其他生物大分子純化、脫鹽、濃縮而設(shè)計(jì)的。公司提供1ml和5ml兩種規(guī)格的中壓層析空柱,客戶可根據(jù)樣本特性,靈活地選用合適的柱管及其相關(guān)填料介質(zhì)(包括離子交換、免疫親和、分子篩和反相等類型)。
 
  親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析空柱上樣時(shí)應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件,包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度、溫度等,以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。

 

 
  一般生物大分子和配體之間達(dá)到平衡的速度很慢,所以樣品液的濃度不易過高,上樣時(shí)流速應(yīng)比較慢,以保證樣品和親和吸附劑有充分的接觸時(shí)間進(jìn)行吸附。
 
  特別是當(dāng)配體和待分離的生物大分子的親和力比較小或樣品濃度較高、雜質(zhì)較多時(shí),可以在上樣后停止流動,讓樣品在層析柱中反應(yīng)一段時(shí)間,或者將上樣后流出液進(jìn)行二次上樣,以增加吸附量。樣品緩沖液的選擇也是要使待分離的生物大分子與配體有較強(qiáng)的親和力。另外樣品緩沖液中一般有一定的的離子強(qiáng)度,以減小基質(zhì)、配體與樣品其它組分之間的非特異性吸附。
 
  生物分子間的親和力是受溫度影響的,通常親和力隨溫度的升高而下降。所以在上樣時(shí)可以選擇適當(dāng)較低的溫度,使待分離的物質(zhì)與配體有較大的親和力,能夠充分的結(jié)合;而在后面的洗脫過程可以選擇適當(dāng)較高的溫度,使待分離的物質(zhì)與配體的親和力下降,以便于將待分離的物質(zhì)從配體上洗脫下來。
 
  上樣后用平衡洗脫液洗去未吸附在親和吸附劑上的雜質(zhì)。平衡緩沖液的流速可以快一些,但如果待分離物質(zhì)與配體結(jié)合較弱,平衡緩沖液的流速還是較慢為宜。
 
  如果存在較強(qiáng)的非特異性吸附,可以用適當(dāng)較高離子強(qiáng)度的平衡緩沖液進(jìn)行洗滌,但應(yīng)注意平衡緩沖液不應(yīng)對待分離物質(zhì)與配體的結(jié)合有明顯影響,以免將待分離物質(zhì)同時(shí)洗下。
 
  以上內(nèi)容便是本次為大家分享關(guān)于親和層析空柱如何上樣的相關(guān)信息,希望大家在看完之后能夠有所收獲,讓我們下次再見吧。

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