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層析柱的裝柱非常重要會(huì)直接影響層析分離效果

更新時(shí)間:2024-06-18      點(diǎn)擊次數(shù):1914
  層析柱的裝柱非常重要,裝柱的效果會(huì)直接影響層析分離效果。有濕法裝柱和干法裝柱等兩種方法。濕法裝柱很簡(jiǎn)單,使用也普遍,就是先用比固定相多一倍的洗脫劑將固定相活成勻漿,柱子底部先用脫脂棉塞緊,然后倒入洗脫劑將脫脂棉中氣泡趕出。
 
  用漏斗將活好的固定相倒入柱子中,打開底部活塞,將柱子中高出固定相的溶劑放出。期間不斷用橡皮棒敲打,將固定相敲實(shí),做到密實(shí)均勻無(wú)氣泡即可。
 
  很多時(shí)候用加壓的方法可以很高效地裝好柱子,而且在柱子中沒(méi)有氣泡產(chǎn)生。
 
  干法裝柱與濕法裝柱剛好相反的是,它是將干燥的吸附劑從柱子上端直接加入到一個(gè)空的柱子中,然后用油泵抽柱子底部,相當(dāng)于減壓過(guò)柱,直到柱子變得很結(jié)實(shí),再用淋洗劑“走柱子”。
 
  干法裝柱的一個(gè)缺點(diǎn)就是在裝入洗脫劑后,由于溶劑和固定相之間的吸附放熱,所以柱子容易變花,影響分離效果。
 
  解決的方法是:
 
  (1)固定相一定要添加結(jié)實(shí);
 
  (2)一定要用較多的溶劑“走柱子”,直到柱子的下端不再發(fā)燙,恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。無(wú)論使用哪種方法裝柱,最后都要求所裝的柱子結(jié)實(shí)、勻稱、無(wú)氣泡。
 

 

 
  上樣的技巧
 
  上樣也有濕法和干法之分:濕法一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶劑越少越好。再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁緩慢地均勻加入。
 
  在不用海沙的情況下,盡量不要破壞硅膠面。加樣后,打開柱底活塞,讓固定相充分地吸附所加樣品。然后再加入一些洗脫劑,再充分地吸附后將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。
 
  然后就可以放心地加入大量洗脫劑,而不會(huì)沖壞硅膠表面。很多樣品在上柱前是粘乎乎的,一般沒(méi)關(guān)系。有的時(shí)候上樣后在硅膠上又會(huì)析出,這一般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn),是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和,而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)析出,這就需要先重結(jié)晶樣品,得到大部分的產(chǎn)品后剩余的產(chǎn)品再柱分。
 
  如果不能重結(jié)晶也沒(méi)關(guān)系,直接過(guò)柱就行,樣品會(huì)隨著淋洗劑流動(dòng)而慢慢溶解,最后隨著洗脫劑流出。有些樣品溶解性差,能溶解的溶劑又不能上柱(比如DMF,DMSO等,會(huì)隨著溶劑一起走,顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾),這時(shí)就必須用干法上柱了。
 
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